在毕赤酵母中表达的重组人血管内皮生长因子(rhVEGF 121)为氨基端4个氨基酸缺失的异构体

摘要：

为获得重组人血管内皮生长因子,采用重叠PCR扩增出含Kozak顺序、α因子前导肽和hVEGF 121的融合基因,经DNA测序无误后,插入Pichia pastoris酵母载体,并体外构建4拷贝表达单元质粒pAO815-4KαVEGF 121.表达载体转化酵母宿主菌GS115,筛选出高效表达hVEGF的转化子.摇瓶培养并1%甲醇诱导80h的VEGF分泌性表达量可达30mg/L.表达产物经S-Sepharose离子交换层析纯化后测活表明表达产物二聚体具有良好生物活性.SDS-PAGE分析、Western印迹表明表达产物具有适宜的分子量和抗原性.VEGF蛋白经氨基端氨基酸测序证实纯化后的不同糖化程度产物为同一蛋白质,但均为氨基端缺失了4个氨基酸的全长为117个氨基酸的VEGF.

关键词：重组人血管内皮生长因子、甲醇营养型酵母表达体系、氨基酸顺序测定

所属期刊栏目：24

分类号：Q81(生物工程学(生物技术))

在线出版日期：2004-05-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：67-72