miR-206调控SIRT1/AMPK通路影响脂质代谢改善非酒精性脂肪肝的研究

摘要：

目的:探讨miR-206对长链游离脂肪酸(FFA)诱导HepG2细胞建立的非酒精性脂肪肝(NAFLD)细胞模型的影响及其对沉默信息调节因子1(SIRT1)/AMPK通路的调控.方法:用1mM的FFA处理HepG2细胞24 h构建NAFLD细胞模型,根据转染物质的不同分为6组:Control组(无任何处理)、FFA组(构建NAFLD模型)、FFA+mimics NC组(转染mimics NC质粒)、FFA+miR-206 mimics 组(转染 miR-206 mimics 质粒)、FFA+Vector 组(转染 Vector 质粒)、FFA+OE-SIRT1 组(转染 OE-SIRT1 质粒).油红O染色法检测细胞中脂质蓄积情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测谷草转氨酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)及甘油三酯(TG)含量,荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-206、SIRT1 mRNA表达量,Western blot法检测SIRT1、固醇调节元件结合蛋白1(SREBP1)、脂肪酸合成酶(FAS)、硬脂酰辅酶A1(SCD1)、乙酰CoA羧化酶1(ACC1)、白细胞分化抗原36(CD36)、AMP活化蛋白激酶(AMPK)及p-AMPK蛋白水平,TargetScan在线网站预测miR-206与SIRT1结合位点,双荧光素酶报告基因实验验证miR-206与SIRT1的靶向关系.结果:与Control组比较,FFA组细胞AST、ALT及TG含量明显升高,TG含量升高,miR-206、SIRT1蛋白及基因mRNA含量明显降低,SREBP1、FAS、SCD1、ACC1及CD36蛋白含量升高,p-AMPK/AMPK比值降低,差异具有统计学意义(P均＜0.01).与FFA+mimics NC组细胞比较,FFA+miR-206 mimics组细胞内TG含量下降,SREBP1、FAS、SCD1、ACC1及CD36蛋白水平降低,SIRT1蛋白及基因mRNA水平升高,p-AMPK/AMPK比值升高,差异具有统计学意义(P均＜0.01).与FFA+Vector组细胞比较,FFA+OE-SIRT1组细胞内TG含量下降,SREBP1、FAS、SCD1、ACC 1及CD36蛋白水平降低,p-AMPK/AMPK比值升高,差异具有统计学意义(P均＜0.01).TargetScan在线网站预测发现,miR-206与SIRT1野生型存在结合位点.SIRT1 WT+miR-206 mimics组细胞荧光素酶活性高于SIRT1 WT+mimics NC组,差异具有统计学意义(P＜0.01).结论:上调miR-206能够通过SIRT1/AMPK通路减轻NAFLD引起的肝细胞脂质代谢.

关键词：非酒精性脂肪肝、miR-206、沉默信息调节因子1

所属期刊栏目：24

分类号：R-33;R575(医学研究方法)

资助基金：新疆神经系统疾病研究重点实验室开放课题项目;新疆维吾尔自治区自然科学基金

在线出版日期：2024-08-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：3032-3038