miR-96-5p靶向FOXO1调节脑缺血再灌注损伤机制

摘要：

目的:探究miR-96-5p在脑缺血再灌注损伤(CIRI)中的作用及机制.方法:通过qRT-PCR检测36例确诊的缺血性脑卒中患者(IS患者组)和30例健康体检者(健康组)的血清miR-96-5p水平.将PC12细胞分为5组:对照组、NC-ag组、miR-96-5p-ag组、NC-an组、miR-96-5p-an组.采用Lipofectamine 2000对PC12细胞进行转染,通过qRT-PCR验证转染效率.将PC12细胞分为6组:对照组、氧糖剥夺/复氧复糖(OGD/R)组、OGD/R+NC-ag 组、OGD/R+miR-ag 组、OGD/R+NC-an 组、OGD/R+miR-an 组.根据分组对PC12细胞进行OGD/R处理和转染.通过MTT法检测PC12细胞活力,TUNEL法检测PC12细胞凋亡.采用改良Longa法建立大鼠CIRI模型,然后将大鼠分为假手术组、CIRI组、CIRI+NC-an组和CIRI+miR-an组.假手术组和CIRI组大鼠尾静脉注射生理盐水,CIRI+NC-an组和CIRI+miR-an组大鼠分别尾静脉注射NC-antagomir和miR-96-5p-antagomir.然后检测各组大鼠的神经功能评分、脑梗死体积和脑组织细胞凋亡情况.按照试剂盒说明书测定PC12细胞和大鼠脑组织中MDA、SOD和GSH-Px的含量.通过qRT-PCR检测PC12细胞和大鼠脑组织miR-96-5p和Forkhead box O1(FOXO1)mRNA水平,通过Western blot检测FOXO1、Ac-FOXO1、Bax和Bcl-2的蛋白表达水平.结果:与Health组比较,IS组患者的血清miR-96-5p水平显著升高(P＜0.001).与对照组和NC-ag组比较,miR-96-5p-ag组的miR-96-5p水平升高,FOXO1的mRNA和蛋白表达水平均降低,FOXO1的乙酰化水平升高(P＜0.05).与对照组和NC-an组比较,miR-96-5p-an组的miR-96-5p水平降低,FOXO1的mRNA和蛋白表达水平均升高,FOXO1的乙酰化水平降低(P＜0.05).与OGD/R组和OGD/R+NC-an组比较,OGD/R+miR-an组的相对细胞活力升高,TUNEL阳性率降低,Bax的蛋白相对表达量降低,Bcl-2的蛋白相对表达量升高,MDA水平降低,SOD和GSH-Px水平升高,miR-96-5p水平降低,FOXO1的mRNA和蛋白表达水平升高,FOXO1的乙酰化水平降低(P＜0.05).与CIRI组和CIRI+NC-an组比较,CIRI+miR-an组大鼠的神经功能评分和脑梗死体积降低,TUNEL阳性率降低,Bax的蛋白相对表达量降低,Bcl-2的蛋白相对表达量升高,MDA水平降低,SOD和GSH-Px水平升高,miR-96-5p水平降低,FOXO1的mRNA和蛋白表达水平升高,FOXO1的乙酰化水平降低(P＜0.05).结论:miR-96-5p在CIRI发生过程中表达上调,而下调miR-96-5p表达可能通过负调控FOXO1以减轻CIRI程度.

关键词：缺血性脑卒中、脑缺血再灌注损伤、miR-96-5p、Forkhead box O1、氧化应激

所属期刊栏目：23

分类号：R-33;R743.3(医学研究方法)

资助基金：陕西省重点研发计划2019SF-046

在线出版日期：2023-07-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共9页

页码：2221-2228,2279