稳定表达Cas9蛋白的SW620细胞株构建

摘要：

目的:建立稳定表达Cas9蛋白的SW620人结肠癌细胞系的单克隆细胞株,提高基因编辑效率,为利用基于CRISPR/Cas9技术的高通量筛选结肠癌相关致病基因提供细胞工具.方法:用Cas9慢病毒侵染SW620细胞系,用致死剂量的puro筛选5-7天,通过有限稀释法获得单克隆细胞株.提取单克隆细胞基因组进行Sanger测序,筛选出含有Cas9基因序列的单克隆细胞株.利用基于SSA修复荧光素酶的报告系统检测单克隆细胞株中Cas9的编辑活性,并通过细胞增殖实验检测Cas9蛋白的表达是否影响细胞增殖.结果:获得了两个表达Cas9蛋白的SW620单克隆细胞株,并通过Sanger测序验证了 Cas9序列;荧光素酶报告系统检测显示单克隆细胞株的Cas9蛋白有较高的编辑活性;细胞增殖实验显示Cas9蛋白的表达对SW620增殖活性影响不大.结论:本研究利用慢病毒感染的方式,构建了稳定表达Cas9蛋白的SW620单克隆细胞株,为后续大规模筛选与人结肠癌相关的基因突变提供了细胞工具.

关键词：CRISPR/Cas9、单克隆细胞株、慢病毒、SW620细胞系

所属期刊栏目：23

分类号：R-33;R735.3;Q78(医学研究方法)

资助基金：北京中医药大学重点攻关项目2020-JYB-ZDGG-058

在线出版日期：2023-05-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1041-1045