基于CRISPR/Cas9技术构建CELF6基因敲除细胞系并探讨CELF6与p53基因的关系

摘要：

目的:构建CELF6基因敲除细胞系并探讨CELF6与p53基因之间的关系.方法:CRISPR/Cas9双载体慢病毒系统通过两个慢病毒载体分别向细胞中导入Cas9蛋白和sgRNA序列表达框,从而实现对CELF6基因的敲除.通过Surveyor(错配酶法)检测sgRNA活性并利用Western blot(蛋白质免疫印迹)检测CELF6的敲除效率.进一步利用CCK-8试剂盒检测敲除CELF6和过表达CELF6对细胞增殖的影响.利用公开可用的癌症基因组图谱(TCGA)数据库分析CELF6在多种肿瘤组织中的表达情况.结果:CELF6基因敲除的HCT116细胞系成功构建.Western blot检测发现CELF6基因敲除的细胞系中p53、p-RB蛋白的表达水平显著下调,而CELF6过表达的细胞中p53、p-RB蛋白的表达水平明显上调.CCK-8实验结果显示敲除CELF6基因后,细胞增殖活性显著增强;而过表达CELF6后,细胞的增殖活性受到明显抑制.生物信息学分析发现CELF6在结肠癌、胶质母细胞瘤、子宫内膜癌、肾嫌色细胞癌、乳腺癌、甲状腺癌等肿瘤组织中显著低表达.结论:推测CELF6是一种新的潜在肿瘤抑制基因,其可能在肿瘤的发生、发展过程中发挥重要作用.

关键词：CRISPR/CAS9、CELF6、p53、细胞增殖、肿瘤抑制基因

所属期刊栏目：19

分类号：R-33;Q78;R730.231(医学研究方法)

资助基金：国家自然科学基金面上项目31571418

在线出版日期：2020-11-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共7页

页码：3201-3207