慢病毒载体沉默ADAMTS6人非小细胞肺癌稳转株的构建

摘要：

目的:通过数据库预测ADAMTS6在非小细胞肺癌(Non-small-cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达及其与NSCLC患者临床预后的关系,构建ADAMTS6的shRNA干扰载体并建立ADMATS6的NSCLC稳定敲减细胞株.方法:通过Oncomine数据库分析ADAMTS6在NSCLC组织和肺正常组织的表达差异,通过Kaplan-Meier Plotter数据库分析ADAMTS6的表达水平与临床NSCLC患者预后关系,设计合成ADAMTS6的shRNA干扰序列,shRNA模板退火并与双酶切pGLV3-GFP线性化载体连接,转化挑取阳性菌落后送测序.干扰质粒进行病毒包装并感染人NSCLC细胞株NCI-H358,使用嘌呤霉素进行稳定敲减细胞株筛选.荧光观察慢病毒感染细胞密度,通过qRT-PCR和Western blot检测ADAMTS6的mRNA和蛋白水平的敲减效果.结果:Oncomine数据库分析结果显示NSCLC组织中ADAMTS6 mRNA表达较正常肺组织显著升高(P＜0.001) Kaplan-Meier Plotter数据库分析结果显示高表达ADAMTS6的NSCLC患者预后较低表达ADAMTS6的NSCLC患者差(P＜0.05);pGLV3-GFP载体双酶切线性化后与shRNA退火模板连接成功,测序结果正确.荧光观察显示慢病毒感染细胞密度在95％左右,通过qRT-PCR和Western blot检测ADAMTS6慢病毒干扰质粒已成功敲减ADAMTS6的mRNA和蛋白水平.结论:ADAMTS6的高表达可能与NSCLC患者的不良临床预后密切相关.本研究构建了ADAMTS6的慢病毒感染质粒,并成功建立NCI-H358稳定敲减细胞株,为进一步研究ADAMTS6在NSCLC中的作用及机制奠定了基础.

关键词：ADAMTS6、慢病毒载体、肿瘤数据库、小发卡RNA、非小细胞肺癌

所属期刊栏目：19

分类号：R-33;Q78;R734.2(医学研究方法)

资助基金：国家重点研究发展计划项目;南京医科大学高水平创新团队项目

在线出版日期：2020-11-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1401-1405,1415