携带小鼠白介素-4截短型突变体基因的5型腺相关病毒载体的构建及外源蛋白的体外表达

摘要：

目的:制备携带碳端结构域缺失的小鼠白介素-4(Interleukin-4,IL-4)基因突变体的5型重组腺相关病毒(recombinant adenoassociated virus,rAAV)并在细胞水平检测其介导的外源蛋白表达情况.方法:通过分子克隆技术构建携带小鼠IL-4碳端22个氨基酸缺失的突变体的表达质粒pSNAV-mIL-4AC22,三质粒共转染法制备重组的5型AAV病毒,体外感染人支气管上皮样细胞系16HBE和BEAS-2B,并通过Western blot和ELISA检测外源蛋白表达.结果:DNA测序表明构建的小鼠IL-4碳端第118位氨基酸位点处截短的突变体基因表达序列正确无误,制备的重组病毒载体rAAV5-mIL-4AC22滴度约为3× 1011 vg/mL.rAAV5-GFP感染16HBE和BEAS-2B细胞后36小时开始可见持续稳定的荧光蛋白表达,重组病毒rAAV5-mIL-4AC22感染16HBE和BEAS-2B细胞后外源蛋白在培养上清中呈分泌型表达.结论:本研究成功构建了携带小鼠IL-4碳端结构域缺失型突变体的AAV表达质粒并制备了重组病毒rAAV5-mIL-4AC22,该病毒可有效转染16HBE和BEAS-2B细胞并介导外源基因分泌表达截短型小鼠IL-4突变体蛋白.

关键词：白介素-4、突变体、腺相关病毒、基因治疗

所属期刊栏目：19

分类号：R-33;Q78;R562.25(医学研究方法)

资助基金：国家自然科学基金项目81300016,31500704

在线出版日期：2020-11-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：211-216