10.13241/j.cnki.pmb.2018.17.001
miR-203下调TLR4-Myd88-NF-κB信号通路诱导M2型巨噬细胞极化
目的:验证 miR-203通过与TLR4 mRNA 的3'-UTR特异性结合下调TLR4-Myd88-NF-κB 信号通路诱导M2 型巨噬细胞极化.方法:通过 miRanda 软件预测 TLR4 mRNA3'-UTR 存在 miR-203 结合位点.根据 TLR4 mRNA3'-UTR 序列设计目的基因片段以及突变型目的基因片段,以 pmirGLO 为载体构建双荧光素酶报告基因野生型载体(pmirGLO-TLR43'-UTR)及其突变型载体(pmirGLO-mut-TLR43'-UTR). 将293T 细 胞 共 转 染 pmirGLO-TLR43'-UTR 质 粒 或 pmirGLO-mut-TLR43'-UTR 质 粒 及 mmu-miR-203-3p mimics 或 mimic NC,通过双荧光素酶报告基因系统验证 miR-203 可以与 TLR4 mRNA 的3'-UTR 特异性结合,通过 Real-time PCR 及 Western blot 验证小鼠巨噬细胞 RAW264.7 转染了 mmu-miR-203-3p mimics、mimic NC 后,M1 型巨噬细胞 markers(iNOS, TNF-α, CCL-3, IL-23),M2 型巨噬细胞 markers(Arg-1, CX3CR1, IL-4, MRC, IL-10, Ym-1)及 TLR4-Myd88-NF-κB信号通路的表达.使用 TLR4 抑制剂 TAK-242 抑制小鼠巨噬细胞 TLR4-Myd88-NF-κB 信号通路后,转染 mmu-miR-203-3p mimics、mimic NC,再次检测 M1,M2 型巨噬细胞 markers 及 TLR4-Myd88-NF-κB 信号通路的表达.结果:双荧光素酶报告基因系统显示293T 细胞转染了 pmirGLO-TLR43'-UTR 质粒及 mmu-miR-203-3p mimics 后,其相对荧光素酶活性△CT 较转染了 pmirGLO-mut-TLR43'-UTR 质粒或者 mimic NC均有显著降低,其差异达到统计学意义(P＜0.05).Real-time PCR 及 Western blot 显示转染了 mmu-miR-203-3p mimics 的小鼠巨噬细胞 M1 型巨噬细胞 markers(iNOS, TNF-α, CCL-3, IL-23)表达减少,M2 型巨噬细胞 markers(Arg-1, CX3CR1, IL-4, MRC, IL-10, Ym-1)表达增加,同时伴有 TLR4-Myd88-NF-κB 信号通路表达下调,而通过给予 TAK-242 抑制了 mmu-miR-203-3p mimics 下调 TLR4-Myd88-NF-κB 信号通路及诱导 M2 型巨噬细胞极化的作用.结论:miR-203与 TLR4 mRNA 的3'-UTR 特异性结合下调 TLR4-Myd88-NF-κB 信号通路诱导 M2 型巨噬细胞极化.
miR-203、RAW264.7、双荧光素酶报告基因系统、巨噬细胞极化、TLR4-Myd88-NF-κB
18
R-33;Q78;R692;R329.2(医学研究方法)
国家自然科学基金项目81200504;上海交通大学医工交叉项目[多学科交叉项目培育医工]YG2016MS20
2019-08-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共8页
3201-3208
