10.13241/j.cnki.pmb.2018.15.011
促甲状腺激素对大鼠心肌成纤维细胞影响的研究
目的:探讨促甲状腺激素 (TSH) 对SD乳鼠心肌成纤维细胞 (CFs) 的影响及机制.方法:新生1-3 d的SD乳鼠15只, 处死后进行CFs的分离与培养, 倒置显微镜对原代培养细胞形态进行鉴定, 免疫组织化学染色法对CFs胞浆内波动蛋白进行染色并鉴定.后续实验过程中, 按照使用b TSH工作液的稀释浓度分为A组 (1μmol·L-1) 、B组 (2μmol·L-1) 、C组 (4μmol·L-1).MTT法检测心肌成纤维细胞增殖率.酶联免疫吸附法 (ELISA) 检测培养细胞的上清液中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白含量.荧光定量PCR反应测定培养细胞上清液中基质金属蛋白酶-2 (MMP-2) 、基质金属蛋白酶-9 (MMP-9) m RNA的相对表达量.Western-blot法检测培养细胞上清液中MMP-2、MMP-9的蛋白表达水平.结果:CFs的形态学变化及纯度鉴定结果显示乳鼠CFs培养成功.MTT试验结果显示, 24 h时后, A、B、C组CFs的增殖率分别为112.91±10.23、123.22±9.34、132.56±9.36;48 h时后, A、B、C组CFs的增殖率分别为124.4±8.34、133.5±9.02、139.6±11.36.随着b TSH浓度的增加, CFs增殖率呈逐渐增加趋势.ELISA检测结果显示, A、B、C组I型胶原蛋白表达水平分别为 (2.61±0.31) μg·L-1、 (5.53±0.66) μg·L-1、 (7.91±0.74) μg·L-1;A、B、C组Ⅲ型胶原蛋白表达水平分别为 (3.96±0.25) μg·L-1、 (6.72±0.52) μg·L-1、 (8.11±0.65) μg·L-1.随着b TSH浓度的升高, I型和Ⅲ型胶原蛋白表达水平呈升高趋势.荧光定量PCR法检测结果显示, A、B、C组MMP-2的m RNA表达量分别为9.124±1.021、15.223±1.536、18.678±1.742;A、B、C组MMP-9的m RNA表达量分别为16.447±1.664、17.402±1.881、24.247±2.364.随着b TSH浓度的增加, MMP-2、MMP-9的m RNA相对表达量呈增加趋势.Western-blot法检测结果显示, A、B、C组MMP-2灰度值分别为165.41±16.57、198.25±21.34、223.41±19.08;A、B、C组MMP-9灰度值分别为140.30±15.09、190.47±20.06、230.14±21.45.随着b TSH浓度的增加, MMP-2、MMP-9的蛋白表达水平呈增加趋势.结论:TSH能够促进乳鼠CFs细胞增殖及I、Ⅲ型胶原蛋白表达增加, 导致细胞外基质成分降解及合成过程失调.
促甲状腺激素、心肌成纤维细胞、胶原、金属蛋白酶
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R-33;R54;Q575.14(医学研究方法)
陕西省教育厅科技计划项目17JK0667;西安医学院校级课题2016QN14
2019-08-06（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共6页
2855-2860
