MiR-301b抑制转录因子Klf4影响肝癌细胞迁移

摘要：

目的:探讨miR-301b对肝癌细胞迁移能力的影响及其分子机制,为肝癌的分子靶向治疗研究提供新线索.方法:体外培养人肝癌细胞株SK-Hep-1、HCC-LM3和人永生化肝细胞株L02,采用RT-PCR方法检测miR-301b表达.通过生物信息学软件Targetscan及miRanda预测miR-301b的靶基因,筛选出转录因子Klf4基因为miR-301b的下游靶基因,通过双荧光素酶报告基因实验和Western Blot实验证明其调控作用.通过划痕和Transwell实验探究miR-301b靶向Klf4基因对肝癌细胞迁移性的影响,Western Blot检测miR-301b对上皮间质转化标记物E-cadherin、N-cadherin蛋白表达的影响.结果:与正常肝细胞相比,肝癌细胞株中miR-301b表达水平明显升高.瞬时转染miR-301bmimic后,实验组miR-301b的表达显著高于对照组;瞬时转染miR-30 lb inhibitor后,实验组miR-301b的表达显著低于对照组.双荧光素酶报告基因实验显示:miR-301b直接作用于Klf4基因的3'UTR区,并下调Klf4蛋白的表达,与软件预测结果相符合.划痕实验及Transwell迁移实验显示:miR-301b通过下调Klf4基因,促进肝癌细胞的迁移.进一步实验显示:过表达miR-301b显著下调E-cadherin的表达,而上调N-cadherin的表达.结论:miR-301b在肝癌细胞SK-Hep-1、HCC-LM3中高表达,可能通过抑制靶基因Klf4的表达,促进肝癌的迁移,miR-301b可能参与了肝癌细胞的上皮间质转化过程.

关键词：MicroRNA-301b、Klf4、肝细胞癌、迁移

所属期刊栏目：18

分类号：R-33;R735.7(医学研究方法)

资助基金：国家自然科学基金面上项目81572310

在线出版日期：2019-08-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：1806-1811