H1N1流感病毒血凝素对人肺细胞的损伤作用及机制研究

摘要：

目的:研究H1N1流感病毒血凝素HA对人胚肺成纤维细胞的损伤作用并初步探讨其机理.方法:合成2009 H1N1的HA基因全长,分别将HA的PCR产物和pEGFP-N1质粒经Hind Ⅲ和EcoRⅠ酶切电泳、纯化、连接并转化大肠杆菌DH5α,构建真核表达质粒pEGFP-N1/HA.质粒转柒293细胞,检测其转染效率,并收获细胞总蛋白进行Western blotting检测.将阳性质粒转染MRC-5细胞,CCK-8检测HA的表达对细胞增殖活性,线粒体膜电位检测试剂盒检测其对细胞的早期凋亡的影响,ATP检测试剂盒检测HA的表达对ATP水平的改变.结果:PCR电泳检测获得分子量为1700 bp左右的目的条带,菌落PCR鉴定HA片段成功插入pEGFP-N1载体.荧光显微镜下检测pEGFP-N1/HA转染293细胞有明显荧光,Western blotting结果显示pEGFP-N1/HA转染细胞有单一的目的蛋白表达.HA的表达可明显抑制MRC-5细胞活力,HA的高表达降低MRC-5细胞的线粒体膜电位及ATP水平.结论:H1N1流感病毒HA对人肺细胞的损伤作用可能与影响肺细胞的线粒体功能有关.

关键词：H1N1流感病毒、血凝素、人胚肺成纤维细胞、线粒体

所属期刊栏目：18

分类号：R-33;R373.1;R322.35(医学研究方法)

资助基金：国家自然科学基金青年基金项目81202373;陕西省高校科协青年人才托举计划项目20170408;西安医学院2016年博士科研启动基金项目2016DOC13

在线出版日期：2018-06-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1029-1033