新型荧光探针mMaple3与mEos3.2应用于Fsp27介导脂滴融合的功能研究

摘要：

目的:Fsp27已经被证明定位在脂滴上并且介导脂滴融合与增大.为研究Fsp27介导脂滴融合的动态分子机制,我们构建了Fsp27-mMaple3和Fsp27-mEos3.2两种新型荧光探针的融合蛋白并研究其对脂滴融合的功能影响,进而为研发Fsp27相关生理功能的光学显像技术奠定基础.方法:对照传统绿色荧光的融合蛋白Fsp27-EGFP,在共聚焦显微镜下观察Fsp27-mMaple3和Fsp27-mEos3.2两种新型融合蛋白的亚细胞定位和介导脂滴融合的功能,并利用荧光漂白恢复术(fluorescence recovery afterphoto-bleaching,FRAP)以判断脂滴与脂滴之间是否存在脂的交换.结果:表达Fsp27-mMaple3和Fsp27-mEos3.2两种新型融合蛋白的细胞中脂滴显著增大;同时,融合蛋白皆集中在脂滴与脂滴的接触位点上,且中性脂的交换实验显示脂滴与脂滴之间可以相互连通.结论:我们建构的两种新型荧光探针融合蛋白Fsp27-mMaple3和Fsp27-mEos3.2保持了Fsp27介导脂滴融合的功能,并为我们进一步研发新型的超分辨光学显像技术提供功能基础.

关键词：脂滴、荧光探针、亚细胞定位、Fsp27

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分类号：Q593;Q78

资助基金：中国博士后科学基金项目2013T60103,2012M520249;周林康博士受中国科协2016-2018年度青年人才托举计划的支持

在线出版日期：2018-05-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：601-605