CEP55慢病毒表达载体构建和U251-CEP55细胞株的建立

摘要：

目的:构建CEP55慢病毒表达载体,建立稳定表达CEP55的人脑胶质瘤U251细胞株.方法:使用PCR扩增方法将CEP55基因序列进行扩增,转入质粒中,并整合到载体上,构建重组质粒GV358-CEP55载体.与pHelper1.0和pHelper2.0质粒共转染293T细胞使其产生慢病毒,以GV358空载体包装的慢病毒作为对照.显微镜观察绿色荧光蛋白GFP表达强度,确定慢病毒的感染效率.采用病毒梯度稀释法测定病毒滴度.慢病毒感染人胶质瘤细胞株U251后,经嘌呤霉素筛选出稳定表达CEP55基因的细胞株U251-CEP55.qRT-PCR和Western blot两种方法分别检测CEP55 mRNA及蛋白的表达.结果:测序证实慢病毒表达载体GV358-CEP55构建成功;转染293T细胞获得高滴度的病毒.病毒感染U251细胞后,使用嘌呤霉素筛选得到稳定转染细胞株U251-CEP55;qRT-PCR和Western blot方法分别检测后发现,U251-CEP55细胞株中CEP55 mRNA和蛋白水平的表达明显高于对照组.结论:成功构建CEP55慢病毒表达载体,获得稳定表达CEP55的人胶质瘤U251细胞株,为CEP55基因功能的探究给予了一定的实验基础.

关键词：CEP55基因、慢病毒载体、U251细胞

所属期刊栏目：17

分类号：R-33;Q78;R739.4(医学研究方法)

资助基金：国家自然科学基金项目81402073;江苏省自然科学基金项目BK20130218

在线出版日期：2018-01-25（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：6422-6426,6421