Western blot免疫印迹法检测磷酸化蛋白表达条件优化研究

摘要：

目的:探讨Western blot免疫印迹法不同转膜方法和不同抗原抗体比例对磷酸化蛋白表达的检测效果.方法:选择肌球蛋白轻链(myosin light chain,MLC)及其磷酸化蛋白作为研究对象,比较半干转印法、湿转法和1∶3000、1∶5000、1∶10000等抗体稀释比例对磷酸化蛋白检测效果的影响.结果:半干转印法(恒压16V,30 min)观察到蛋白信号断续;而同样样品利用湿转法(恒压130V,1h)检测发现信号连续且强度明显增高;对于磷酸化蛋白,半干转印法无法观察到磷酸化蛋白信号;而同样样品湿转法检测出现连续信号.统一利用湿转方法进行后续蛋白磷酸化检测,当抗体稀释比为1∶3000时,结果出现非特异性条带;降低抗体稀释比为1∶5000时无非特异性条带,且蛋白信号效果较好;抗体稀释比为1∶10000时条带图像出现弥散且背景较高.结论:选择合适的转膜方式和抗原抗体比例有助于磷酸化蛋白表达检测.

关键词：蛋白质免疫印迹法、半干转印、湿转、抗原抗体比例

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分类号：R446.6(诊断学)

资助基金：国家自然科学基金项目81473760,81574058;上海市卫生系统优秀青年人才培养计划XYQ2013081;上海市中医药事业发展三年行动计划重大研究项目ZY3-CCCX-3-3005;上海市人才发展资金201610

在线出版日期：2017-07-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：4047-4050,4037