细胞因子人脂联素全序列蛋白的真核表达及晶体生长

摘要：

目的:找寻适用于脂联素全序列蛋白的结晶条件,为解析其空间结构奠定基础,从而研究脂联素聚合体的内在构成模式,为开发高活性脂联素类衍生细胞因子提供参考.方法:首先构建脂联素全序列蛋白的真核表达载体,对其进行诱导表达,然后通过经亲和层析和凝胶过滤分离纯化后,得到高纯度的脂联素全序列蛋白,最后尝试使用坐滴法和悬滴法以及多种温度环境和结晶液条件,从而找寻适于脂联素全序列蛋白质的结晶条件.结果:通过纯化后的脂联素蛋白纯度可以达到91.3％,在溶液中的粒径分布于2nm到4nm.在线性变温条件下(24 h内,由277 K线性升温至313K,再线性降温至277 K),通过悬滴法于48 h可获得脂联素全序列蛋白的针状晶体.结论:本研究选择真核载体,以亲和层析和凝胶过滤为分离纯化手段,得到了纯度高,粒径均一的脂联素全序列蛋白.随后通过尝试多种结晶方法、条件和环境,初步确定获得脂联素全序列蛋白晶体的条件,为后续获得高质量单晶提供了参考.

关键词：人脂联素、真核表达、空间结构、晶体生长

所属期刊栏目：17

分类号：Q816;R-33(生物工程学(生物技术))

资助基金：陕西省科技厅科技攻关项目2016SF-264;陕西省科学院科技计划项目2013K-10;陕西省科学院科技计划项目2016K-17

在线出版日期：2017-07-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：3016-3019