胰腺癌潜在肿瘤标志物的探索及在胰腺癌中的应用

摘要：

目的:探索胰腺癌新的潜在标志物,建立夹心法ELISA体系,并初步应用于胰腺癌患者的血清检测.方法:应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术对胰腺癌患者术前后血清进行分析,提纯分析差异蛋白并命名为DAP44,通过杂交瘤技术制备出抗DAP44单克隆抗体,用HRP标记法标记抗体,间接ELISA法检测抗体滴度,用制备出的抗体对胰腺癌组织和癌旁组织进行组化染色,采用夹心ELISA(DAS-ELISA)法制备抗DAP44检测试剂盒,检测胰腺癌病人和正常人血清DAP44值,比较两者差异.结果:对差异蛋白进行肽段测序和生物信息分析,并融合了3株能稳定分泌抗DAP44单克隆抗体的杂交瘤细胞(2D6H5,1E4D6,5B8H12),3株杂交瘤细胞分泌的抗体效价均在107以上,通过抗体配对筛选确定以2D6H5为包被抗体,1EAD6为酶标抗体时,DAS-ELISA法敏感性最高.两株抗体组化染色结果显示:癌组织DAP44表达量远高于癌旁.DAS-ELISA法标准曲线线性范围在0.78-25 ng/mL,检测下线为0.78 ng/mL,此方法检测到的胰腺癌病人和正常人血清DAP44平均含量分别为19.707± 1.464和10.653± 2.221,两者之间有统计学差异(P＜0.001).结论:DAP44可能作为潜在的胰腺癌肿瘤标志物,建立的抗DAP44 DAS-ELISA法体系能够初步用于胰腺癌的临床诊断和疗效评估指标.

关键词：DAP44、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱、DAS-ELISA、胰腺癌

所属期刊栏目：17

分类号：R-33;R446.62;R735.9(医学研究方法)

资助基金：国家自然科学基金项目81372607

在线出版日期：2017-05-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：2241-2246