低浓度CO暴露促进大鼠肝前体细胞增殖的体外研究

摘要：

目的:观察低浓度一氧化碳暴露对营养相对匮乏情况下大鼠肝前体细胞系生长的影响并探索其作用机制.方法:分别在营养充足(10％胎牛血清,10％FBS)和营养相对匮乏(4％胎牛血清,4％FBS)条件下对大鼠肝脏前体细胞系WB-F344进行体外培养,观察细胞的生长情况;同时,在不同两组4％FBS培养基中分别加入无活性的一氧化碳释放分子iCORM-2和有活性的一氧化碳释放分子CORM-2,两者的浓度均为100 μM,观察比较低浓度一氧化碳暴露是否有利于WB-F344的生长和增殖;利用吖啶橙染色观察不同组别培养细胞酸性自噬小体的形成情况,并进行Western-Blot,检测自噬相关蛋白LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ的转化情况,探讨其可能的作用分子机制.结果:在含有10％FBS的培养基中,WB-F344细胞生长良好,呈指数生长,并在第5天达到生长高峰;与其相比,4％FBS培养基对WB-F344的生长有明显抑制,细胞生长相对缓慢,并且相同时间点的细胞增殖数量明显不足.在进行浓度为100 μM的一氧化碳分子暴露后,WB-F344细胞生长情况有明显改善,细胞增殖的峰值有显著增加.吖啶橙染色显示,4％FBS培养基条件下培养的WB-F344细胞,细胞内出现橘红色荧光,在暴露于低浓度的一氧化碳分子后,橘红色荧光的强度有明显增加.进一步的Western-Blot检测发现,营养相对匮乏的培养基(4％FBS)能使WB-F344细胞在生长过程产生LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化,在暴露于低浓度的一氧化碳分子后,LC3-Ⅱ的量进一步增加,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值显著增大(P＜0.05);进一步的研究显示在此过程中伴随着p-AKT和mTOR蛋白的表达降低,同时,HO-1蛋白的表达增加.结论:低浓度一氧化碳暴露能促进WB-F344细胞产生自噬,有利于大鼠肝前体细胞系的生长和增殖,同时这和AKT/mTOR信号途径的抑制及HO-1的表达增加有关.

关键词：一氧化碳、肝前体细胞、自噬

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分类号：R-33;Q593.1;Q813.1(医学研究方法)

资助基金：国家自然科学基金项目81670593,81272648

在线出版日期：2017-05-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1601-1605