花生主要变应原Ara h2的克隆及原核表达

摘要：

目的:在原核载体中克隆、表达花生主要变应原Ara h2,为其重组变应原应用研究奠定基础.方法:合成花生主要变应原Ara h2基因,设计特异性引物行PCR扩增,经EcoRⅠ、Hind Ⅲ双酶切后与做相应酶切的pET-28a载体连接,转化大肠杆菌BL21,提取质粒进行双酶切鉴定及测序分析,使用IPTG诱导融合蛋白表达,使用Ara h2特异性多克隆抗体对表达产物进行免疫印迹鉴定.结果:成功扩增了Ara h2基因,重组质粒双酶切见目的条带,基因测序显示Ara h2在正确开放阅读框中,基因长423bp,编码140个氨基酸,预测的等电点为5.3,分子量约16660.17 Da,基因比对分析显示其与相关报道的核苷酸序列一致性达100％.重组pET-28a-Ara h2/BL21经0.6 mmol/L IPTG诱导表达可见重组融合蛋白在相应分子量大量表达,使用Ara h2多克隆抗体免疫印迹法能检测到目的蛋白.结论:成功克隆、表达了花生主要变应原Ara h2,为其重组变应原应用研究奠定了基础.

关键词：花生、变应原、Ara h2、克隆、表达

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分类号：Q78;R392.8(基因工程（遗传工程）)

资助基金：广东省自然科学基金项目9151012001000009;广东省科技厅一般项目2014A020212013

在线出版日期：2017-04-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：624-627