人羊膜上皮细胞对脂多糖刺激下的RAW264.7细胞向M1极化的预防作用及其初步作用机制

摘要：

目的:本实验探讨人羊膜上皮细胞(human amniotic epithelial cells,hAECs)预防RAW264.7细胞在脂多糖(LPS)刺激后向M1极化的作用以及可能机制.方法:采用流式细胞仪检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移,ELISA检测细胞释放NO浓度,Real-time PCR检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、精氨酸酶1(arginase-1,Agr-1)及甘露糖受体(mannose receptor,MR又称CD206)等基因表达情况,Western blotting检测RAW264.7胞质蛋白p-IκBα以及胞核蛋白NF-κB的表达.结果:RAW264.7培养基组与hAECs条件培养基干预组的凋亡率分别为5.68％±2.3％、6.68％±2.1％(p＞0.05).LPS刺激组与hAECs条件培养基干预组两组的迁移率分别为42.03±0.07％、14.71±0.04％ (p＜0.05);LPS刺激组与hAECs干预组两组NO释放量分别为27.73± 10 μM、13.33±6.43 μM(p＜0.05);Real Time-PCR结果显示,hAECs干预组M1型巨噬细胞相关基因如IL-1β、TNF-α、iNOS以及rNF-β的表达显著下调,M2型巨噬细胞相关基因如Arg-1、CD206、CD36等表达上调(p＜0.01).Western blotting结果显示,hAECs干预组RAW264.7中胞质蛋白p-IκBa以及胞核蛋白NF-κB的蛋白含量降低.结论:hAECs与RAW264.7预培养能有效预防LPS刺激下RAW264.7向M1极化,其机制可能是通过抑制IκBα蛋白磷酸化来降低核内NF-κB的含量,从而抑制了M1型相关基因的表达.

关键词：羊膜上皮细胞、巨噬细胞极化、M1巨噬细胞、NF-κB

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分类号：R-33;R392.1(医学研究方法)

资助基金：中南大学硕士生自主探索创新项目2014zzts289;长沙科技计划项目K1203005-31;中南大学教师研究基金项目905010092

在线出版日期：2016-11-04（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：5819-5823,5832