10.13241/j.cnki.pmb.2016.18.003
Robo1与Nek9相互作用并影响胃癌细胞迁移
目的:筛选与Robo1分子相互作用的蛋白质,为揭示Robo1调节胃癌细胞迁移能力的机制提供线索 方法:通过Transwell迁移实验检测下调Robo1对胃癌细胞SGC7901迁移能力的影响,并对胃癌细胞SGC7901利用Robo1抗体和lgG分别进行免疫沉淀,再经质谱检测及生物信息学分析筛选与Robo1分子特异性结合的蛋白质,通过免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP)验证蛋白质相互作用 结果:(1)转染Robo1小干扰RNA(siRNA)的SGC7901细胞较转染阴性对照RNA的迁移能力显著降低.(2)通过免疫沉淀、质谱检测和生物信息学分析的两次生物学重复得到一系列与Robo1相互作用的蛋白,筛选出丰度高、重复性好且功能相关的Nek9蛋白 (3)Co-IP实验结果显示与对照抗体相比,Robo1抗体可特异性地将Nek9沉淀下来,同时Nek9抗体也可特异性地将Robo1共沉淀下来,确证了Robo1-Nek9的相互作用.结论:Nek9是与Robo1相互作用的蛋白质,Robo1下调影响人胃癌细胞系SGC7901的迁移能力,可能通过Nek9起作用Robo1-Nek9的相互作用为进一步研究Robo1在胃癌细胞中的功能及机制提供了有利的线索.
Robo1、免疫共沉淀、Nek9、蛋白质相互作用、细胞迁移
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R-33;Q26;R735.2(医学研究方法)
国家自然科学基金项目81402387
2016-06-28(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
3409-3412