TurboFect介导骨形态发生蛋白2转染CHO细胞的研究

摘要：

目的:构建真核表达载体pIRES-EGFP-BMP-2,通过TurboFect转染得到表达BMP-2蛋白的CHO细胞系.方法:利用逆转录PCR方法扩增获得人的BMP-2基因cDNA,克隆入pMD 18-T载体,经PCR、酶切和基因测序分析等方法鉴定重组质粒;将BMP-2连入pIRES-EGFP真核表达载体中,经限制性酶切和PCR扩增鉴定重组质粒.以壳聚糖和TurboFect分别作为基因载体转染CHO细胞,荧光显微镜检测分析转染结果;G418筛选富集转染阳性细胞.结果:成功的克隆得到了BMP-2基因,酶切鉴定成功构建了pIRES-EGFP-BMP-2质粒.与壳聚糖组相比,TurboFect用量为1∶1时,细胞阳性率为(31.92± 1.31)％,高于壳聚糖的细胞阳性率(6.33±1.53)％.目的基因与TurboFect比例为1∶2时转染效率为(42.90±1.10)％高于1∶1的(28.59±2.38)％和1∶3的(37.52±2.14)％.细胞密度调节到5× 103 cells/cm2阳性细胞率可达到(44.43±3.23)％.荧光检测可见荧光阳性细胞得到稳定传代.Western Blot检测可见BMP-2蛋白表达.结论:TurboFect成功的介导了pIRES-EGFP-BMP-2载体转染CHO细胞,建立了稳定表达BMP-2和EGFP的CHO细胞株.

关键词：骨形态发生蛋白2、转染、阳离子聚合物、壳聚糖、TurboFect

所属期刊栏目：16

分类号：Q78;R318(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金项目51103157,81171555

在线出版日期：2016-06-21（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1801-1806