应用Surrogate报告载体提高CRISPR/Cas9对TMEM215基因的打靶效率

摘要：

目的:构建Surrogate报告载体,并利用Surrogate报告载体提高CRISPR/Cas9对HEK293T细胞TMEM215基因打靶效率.方法:构建针对人TMEM215的CRISPR/Cas9表达载体及相应Surrogate报告载体,两者共转HEK293T细胞,通过流式分析、T7EI检测、TA克隆测序等明确Surrogate报告载体对不同sgRNA打靶效率的检测及对基因修饰细胞的筛选富集作用.结果:流式分析结果表明,Surrogate报告载体成功检测出不同sgRNA的打靶效率,并筛选出高效率sgRNA;T7EI检测及TA克隆测序显示,外加嘌呤霉素抗性筛选时,Surrogate报告载体可有效富集基因修饰细胞.结论:成功构建Surrogate报告载体,并利用Surrogate报告载体提高CRISPR/Cas9对HEK293T细胞TME M215基因的打靶效率.

关键词：TMEM215基因、CRISPR/Cas9、Surrogate报告系统

所属期刊栏目：16

分类号：Q75;Q78;R-332;R322.61(分子遗传学)

资助基金：国家自然科学基金项目青年科学基金项目81300397

在线出版日期：2016-04-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：652-656,700