重组抗狂犬病病毒抗体在HEK293EBNA1细胞中的瞬时表达优化

摘要：

目的:优化重组抗体在悬浮无血清培养的HEK293 EBNA1瞬时表达,提高重组抗体表达量.方法:将HEK293 EBNA1细胞适应于无血清悬浮培养,筛选适宜的无血清培养基.使用PEI转染质粒进入细胞,瞬时表达重组抗体;使用Modde软件进行实验设计(DOE),优化转染质粒量、轻重链比例、PEI量等影响瞬时表达的条件.培养上清经亲和纯化,获得目标抗体,用快速免疫荧光灶抑制试验(RFFIT)测定抗体活性,用BCA法测定纯化抗体浓度.结果:293 SFMII为适宜的HEK293 EBNA1细胞无血清悬浮培养基.对抗体表达影响最大的因素是轻重链比例(P=0.00000),其次为质粒浓度(P=0.00086),最后为PEI(P=0.00257).优化的转染条件为:质粒用量0.61 μg/106细胞,轻重链比例2:1,PEI 2.67 μg/106细胞,优化后抗体表达量有显著提高(P=0.007).结论:通过DOE优化获得了重组抗狂犬病病毒抗体的高水平表达,抗体表达量提高了至少50倍.

关键词：HEK293 EBNA1、无血清悬浮培养、抗体瞬时表达、实验设计

所属期刊栏目：15

分类号：Q812(生物工程学(生物技术))

资助基金：甘肃省青年科技基金计划145RJYA290

在线出版日期：2016-03-10（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：6439-6443,6454