MicroRNA-9过表达载体的构建与鉴定

摘要：

目的:MicroRNA(miRNA)是一类对基因表达起着转录后调控的小分子RNA,在正常发育和疾病发生过程中都发挥着重要的功能.其中,miR-9是一个序列高度保守的成员,在神经发育中调节神经干细胞的多种行为,包括分化、迁移等.但是,目前研究发现的miR-9的功能还存在一些相互矛盾和不清楚的地方,因此,我们拟构建miR-9的过表达载体,以便于对miR-9进一步的仔细研究.方法:我们采用分子克隆的常用方法,以pcDNA6.2-GW/miR为基础,构建出pcDNA6.2-GW/miR-9的表达质粒,分别用PCR、酶切和测序的方法验证质粒构建的正确性,并在Hela细胞和NIH3T3细胞中验证该质粒是否可以过表达miR-9小分子.结果:我们成功构建出正确的pcDNA6.2-GW/miR-9表达质粒,并且该质粒无论在人源的Hela细胞还是在小鼠源性的NIH3T3细胞中都可以过表达miR-9小分子.结论:构建了一个在不同种属间通用的miR-9过载体,为我们进一步研究miR-9的功能奠定了基础.

关键词：microRNA、miR-9、过表达载体、pcDNA6.2-GW/miR载体

所属期刊栏目：15

分类号：R-33;Q78(医学研究方法)

资助基金：西安市红会医院院级科研基金项目YJ2013013

在线出版日期：2015-12-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：5033-5037