In-Fusion技术构建Ⅰ型钠通道与绿色荧光蛋白融合表达及其突变载体

摘要：

目的:构建Ⅰ型钠通道(Nav1.1)与绿色荧光蛋白(GFP)融合表达载体及其突变载体.方法:利用In-Fusion技术将SCN1A基因亚克隆到绿色荧光蛋白真核细胞融合表达载体(pAcGFP1-C In-Fusion Ready Linear Vector).PCR扩增SCN1A基因(与线性载体对应两端有15个相同碱基),In-Fusion技术进行融合即得到pCMV-GFP-C-SCN1A.将其转染HEK293T细胞,Western blot检测Nav1.1的表达.定点诱变试剂盒对其进行定点诱变.结果:1.成功构建Nav1.1与GFP融合表达载体pCMV-GFP-C-SCN1A;2.DNA测序表明:在预期位点已经发生突变,SCN1A基因第190位色氨酸密码子(TGG)突变为终止密码子(TGA).结论:Nav1.1与GFP融合表达载体及其突变载体的构建成功,为进一步研究该突变位点导致Nav1.1功能的改变奠定了基础.

关键词：In-Fusion技术、诱变、SCN1A、癫痫

所属期刊栏目：15

分类号：Q75;Q78;R742.1(分子遗传学)

资助基金：国家自然青年科学基金项目81100663

在线出版日期：2015-12-09（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：4037-4039,4055