TNFα和IL-1β靶点抗炎药物筛选细胞模型的构建

摘要：

目的:构建两个高表达人TNFα和IL-1β细胞系,建立抗炎药物筛选细胞模型.方法:运用PCR的方法从载体pCMVSport-TNFα和pCMVSport-IL1β上扩增目的基因,以亚克隆方法将目的基因分别插入真核表达载体pcDNA3.1和pFLAG-CMV中,用单酶切、PCR扩增和基因测序的方法鉴定重组效果,然后将重组成功的质粒转入HEK293细胞系内,挑选能够稳定表达并遗传的单克隆细胞株,用蛋白免疫印迹(Western blot)法分析其表达效果.结果:三种鉴定方法均显示重组质粒构建成功.Western blot结果显示,细胞株T3、T4均能较高表达炎症因子TNF-α;细胞株I2、I3、I5均能较高表达炎症因子IL-1β.结论:成功构建了TNFα和IL-1β靶标的药物筛选细胞模型,为筛选具有抗炎作用的中药提供了一个新平台.

关键词：肿瘤坏死因子α、白介素1β、抗炎、药物筛选、稳定转染

所属期刊栏目：15

分类号：Q785;R965.1(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家自然科学基金项目81072901;教育部博士点基金项目20120013110013;在读研究生资助项目2014-JYBZZ-XS-029;在读研究生资助项目2014-JYBZZ-XS-013

在线出版日期：2015-05-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：1005-1009