hsa-miR-20a低表达慢病毒载体的构建及其表达鉴定

摘要：

目的:构建hsa-miR-20a低表达慢病毒载体,检测其在HL-60中表达.方法:采用In-fusion重组交换克隆法设计并合成hsa-miR-20a前体序列的扩增引物,扩增获得目的片段插入慢病毒GV159中,得到重组的LV-hsa-miR-20a表达载体,通过与包装质粒共转染293T细胞,获得携带hsa-miR-20a的重组慢病毒并测定病毒滴度.取对数生长期HL-60细胞根据病毒滴度及细胞MOI值感染慢病毒,感染后24h、48 h、72 h、96h镜下观察荧光表达情况,判断感染效率,qRT-PCR检测HL-60细胞hsa-miR-20a的表达变化.结果:成功构建LV-hsa-miR-20a低表达慢病毒载体,其病毒滴度为(8E+8)TU/mL.该病毒感染HL-60细胞的效率可高达到80％,并可有效降低HL-60细胞hsa-miR-20a表达水平.结论:成功构建了hsa-miR-20a低表达慢病毒载体,包被的慢病毒可以在HL-60细胞中实现低表达效果,为后续功能研究奠定了基础.

关键词：Hsa-miR-20a、慢病毒载体、HL-60

所属期刊栏目：15

分类号：Q75;Q78(分子遗传学)

资助基金：国家自然科学基金项目81100560

在线出版日期：2015-05-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：804-807