人内皮脂酶584C→T变异型真核稳定表达载体的构建及其对人脐静脉内皮细胞生长的影响

摘要：

目的:构建人内皮脂酶(endothelial lipase,EL)野生型和584C→T变异型真核稳定表达载体及相应的转染细胞模型,为研究584C→T变异对内皮脂酶功能的影响奠定基础.方法:从pMIG/hEL及pMIG/hEL584C→T中双酶切分离出目标片段,与pCMV-N-his载体连接,凝胶电泳、双酶切电泳及测序鉴定构建的野生型和584C→T变异型内皮脂酶载体,而后以Lipofectamine LTX& PLUS为转染试剂,将其转入人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC),G418筛选出稳定表达细胞,荧光定量PCR法检测转染细胞的EL表达,同时观察细胞形态,并用CCK-8法检测转染对细胞生长及细胞倍增时间的影响.结果:凝胶电泳及双酶切电泳结果显示条带位置与预期符合,测序结果表明其序列与GenBank上序列一致.荧光定量PCR法及mRNA电泳均显示:野生型和584C→T变异型转染细胞的EL表达显著高于空载体转染细胞.进一步研究584C→T变异对HUVEC细胞生长的影响,结果表明空载体、野生型EL和584C→T变异型EL转染HUVEC细胞与正常细胞的形态基本一致,且生长曲线和细胞倍增时间也无显著差异.结论:本实验成功构建了人内皮脂酶野生型和584C→T变异型真核稳定表达载体及相应的转染内皮细胞模型.EL 584C→T变异对HUVEC细胞生长无明显影响.

关键词：内皮脂酶、584C→T变异、真核表达载体、细胞生长

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分类号：Q75;Q78;Q591;Q813(分子遗传学)

资助基金：福建省自然科学基金项目2010J01168

在线出版日期：2015-01-26（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：6220-6224