单管可视化环介导等温扩增技术快速检测恶性疟原虫

摘要：

目的:建立一种基于环介导等温核酸扩增技术(Loop-mediated Isothermal Amplification,LAMP)的恶性疟原虫高灵敏可视化闭管检测方法.方法:针对恶性疟原虫核糖体DNA的序列保守区设计LAMP引物,通过优化LAMP体系中的Mg2+、甜菜碱浓度和反应温度等因素,建立环介导等温扩增法;并结合蜡封反应管对产物进行检测,检测结果可直接通过肉眼观察SYBR GreenⅠ荧光显色进行判定.结果:本方法可检测到70个拷贝/管的恶性疟原虫核酸片段,并具有高特异性,可区分检测常见的血液病毒.该法具有如下优点:1、整个反应恒温进行,无需热循环仪;2、闭管检测,极大降低了扩增产物交叉污染的风险;3、检测速度快,整个检测过程只需30 min.结论:该法的建立为恶性疟原虫的现场快速筛检提供了一种简便、高灵敏、高特异的工具.

关键词：恶性疟原虫、环介导等温扩增、闭管反应

所属期刊栏目：14

分类号：R-446;R446.11

资助基金：国家自然科学基金项目81373485;江苏省科技支撑计划-社会发展项目BE2011607

在线出版日期：2014-10-14（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：5014-5018