抗PAI抑制作用的纤溶酶原激活剂突变体的活性研究

摘要：

目的:重组表达抗PAI抑制作用的t-PA突变体,经诱导表达、复性、纯化后进行生物学活性和酶动力学分析.方法:构建pBV220-tpa重组表达质粒,经DNA测序确认后,转化至大肠杆菌DH5a,温控诱导表达,凝胶过滤法对包涵体蛋白进行初步纯化,复性后,过刺桐胰蛋白酶亲和层析柱纯化,酶动力学分析其活性.结果:测序证实,t-PA突变体的DNA序列正确,表达蛋白占总菌体蛋白的30％,经纯化后纯度达90％以上,比活性为7.0× 108IU/mg,t-PA突变体与PAI-1反应后,其活性未受到抑制.t-PA突变体酶的米氏常数Km为0.5298,最大水解速度Vmax为0.0595.结论:经生物学活性测定,表达蛋白能够明显抵抗PAI的抑制作用,并具有良好的生物活性,该突变体有可能成为用量更少、疗效更佳的新型溶栓药物.

关键词：组织型纤溶酶原激活剂、突变体、蛋白表达、纯化、酶动力学

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分类号：Q78;R446(基因工程（遗传工程）)

资助基金：国家“重大新药创制”科技重大专项2009 ZX09103-603

在线出版日期：2014-05-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：3029-3032,3037