人Cuedc2真核表达载体的构建及其在HEK293细胞中的表达

摘要：

目的:构建人Cuedc2的真核表达载体,并进行体外验证.方法:提取人卵巢癌细胞总RNA,通过RT-PCR的方法其反转录为cDNA;以之为模板,利用PCR获得Cuedc2的编码区,纯化后克隆入pcDNA3.1 myc-his(-),利用菌落PCR及DNA测序进行鉴定.最后,采用瞬时转染的方法,将所构建的重组CUEDC2真核表达载体通过脂质体转染HEK293细胞,48h后通过western blot检测Cuedc2蛋白的表达.结果:Cuedc2编码区cDNA正确地插入真核表达载体pcDNA3.1 myc-his(-)中,western blot检测证实其在HEK293细胞中表达,而空载体转染的细胞为阴性,表明所构建的pcDNA3.1 myc-his(-)-Cuedc2能够在体外有效表达.结论:本研究成功地克隆了人Cuedc2 cDNA,构建了重组真核表达载体,并在HEK293细胞中有效表达,为进一步研究人Cuedc2的功能及其与肿瘤的关系奠定了实验基础.

关键词：Cuedc2、真核表达、克隆、cDNA

所属期刊栏目：14

分类号：Q75;Q78;R737.31(分子遗传学)

资助基金：陕西省科技攻关基金资助项目2011K12-10

在线出版日期：2014-05-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：3025-3028