EBV融合基因Z2A腺病毒的制备及其在诱导EBV阳性细胞凋亡的应用

摘要：

目的:构建EB病毒基因LMP2A及BZLF1的融合基因(Z2A)重组腺病毒表达载体,探讨Z2A融合蛋白对EBV+细胞凋亡的作用.方法:利用AdEasy系统构建重组腺病毒载体pAd-Z2A,而后将之转染293细胞(人胚肾细胞)产生重组腺病毒rAd-Z2A.后者用于感染EBV阳性及阴性细胞,RT-PCR、Westem-blotting检测Z2A的mRNA和蛋白表达,以及流式细胞术检测其对EBV阳性细胞凋亡的调控.结果:序列测定和酶切实验均证实,Z2A融合基因正确插入穿梭质粒,并成功获得重组腺病毒表达载体pAd-Z2A及重组腺病毒rAd-Z2A.感染rAd-Z2A的NEC靶细胞检测到Z2A的表达.流式细胞术检测发现,与EBV-细胞组及EBV+空白质粒转染组相比,接种rA1-z2A的EBV+细胞组48h(P＜0.05)凋亡细胞显著增多,72h时细胞近乎全部凋亡(P＜0.01).结论:重组腺病毒rAd-Z2A可有效感染EBV+及EBV-细胞,从而显著促进EBV+细胞凋亡而不影响EBV-细胞,为进一步特异性靶向EBV+肿瘤的基因治疗奠定基础.

关键词：LMP2A、BZLF1、融合基因、腺病毒载体、EBV

所属期刊栏目：14

分类号：Q75;Q78(分子遗传学)

在线出版日期：2014-05-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：2426-2429