无血清无饲养层培养体系在绵羊胚胎干细胞分离中的应用

摘要：

目的:本文采用N2B27无血清无饲养层的完全已知成份的培养体系,通过机械分离法分离不同阶段的绵羊囊胚,观察不同阶段囊胚对分离绵羊类胚胎干细胞的影响.方法:本实验采用N2B27无血清无饲养层成份完全已知的培养体系,利用机械分离法对不同阶段的绵羊囊胚进行分离,观察其绵羊类胚胎干细胞的原代集落形成率,以及AKP染色,多潜能性候选基因Oct-4和Sox-2免疫荧光检测.结果:分离早期阶段绵羊囊胚获得的绵羊类胚胎干细胞的形成率显著低于扩张(孵化)阶段囊胚(19.6％(11/56) vs 36.9％(31/84)) (P＜0.05),同时早期和扩张(孵化)阶段绵羊囊胚的AKP染色和多潜能性候选基因Oct-4、Sox-2的表达呈阳性.结论:N2B27无血清无饲养层培养体系是一种有效分离绵羊类胚胎干细胞的培养基,同时分离绵羊扩张(孵化)阶段的囊胚可以显著的提高原代类胚胎干细胞的建系率,为提高绵羊类胚胎干细胞的建系奠定了基础.

关键词：胚胎干细胞、囊胚、绵羊胚胎、N2B27

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分类号：Q95-3;Q813.1+1(动物学)

资助基金：新疆自治区科技计划项目20111113;新疆自治区科技支疆项目201291147;国家转基因重大专项2011ZX08008-003;国家自然科学基金U1203381

在线出版日期：2014-04-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1012-1016