原代小鼠肝脏细胞的高效分离纯化与培养

摘要：

目的:建立一种能稳定获得高活力和高纯度原代小鼠肝脏细胞的分离、纯化及培养方法.方法:应用改良的Seglen二步法原位灌注和机械离心分离肝脏细胞,并用改良的高糖DMEM培养基进行培养.台盼蓝拒染法检测接种时肝脏细胞的存活率,倒置显微镜动态观察肝脏细胞形态变化,应用免疫荧光技术对肝脏细胞进行Albumin染色.结果:每只小鼠可获取肝脏细胞的总产量平均为1.35× 106/g体重,肝脏细胞存活率＞90％.倒置显微镜下观察贴壁前肝细胞直径为35.14 μm± 4.35 μm,肝脏细胞在接种后3h基本完成贴壁;肝脏细胞接种后24h,所有肝脏细胞均强阳性表达成熟肝脏细胞标志物Albumin,肝细胞纯度＞95％.结论:改良的分离纯化及培养方法能稳定获得高产量、高活率及高纯度的小鼠肝脏细胞.

关键词：肝脏细胞、原代细胞培养、分离、纯化、小鼠

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分类号：Q95-3;Q813.11;R322.47(动物学)

资助基金：上海市科学技术委员会基金项目09ZR1405900

在线出版日期：2014-04-18（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1005-1008