人源蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2基因克隆与原核表达

摘要：

目的:构建蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2的原核表达载体并在大肠杆菌中表达.方法:以人脑组织mRNA为模板,通过RT-PCR扩增出目标cDNA,构建蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-2-pEASY-E1重组质粒.将重组质粒转化进E.coli TOP10感受态细胞中,通过菌落PCR和测序进行阳性克隆的筛选和验证,将正确的质粒转化E.coli Transetta感受态细胞中,通过SDS-PAGE和westem-blot进行蛋白检测和验证,酶促动力学分析SHP-2可溶性蛋白的活性.结果:成功克隆SHP-2功能域,构建SHP-2-pEASY-E1原核表达载体,完成可溶性蛋白的表达；酶促动力学分析结果为:米氏常数Km=0.97mmol/L,Vmax为13.57mmol/L/s.结论:本研究成功构建SHP-2的原核表达载体,重组表达的SHP-2蛋白具有较高的磷酸酶活性.

关键词：SHP-2、基因克隆、蛋白表达

所属期刊栏目：14

分类号：Q75;Q78;Q55(分子遗传学)

资助基金：国家自然科学基金项目81273652

在线出版日期：2014-03-27（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：846-849