嗜热菌Anoxybacillus sp.DL3产蛋白酶条件及其酶学性质研究

摘要：

目的:对Anoxybacillus sp.DL3的产蛋白酶条件及其酶学性质进行研究,为下一步进行蛋白酶基因的克隆、表达提供依据.方法:应用常规方法液体培养细菌,研究温度、pH、培养基中碳源、氮源对菌株产蛋白酶的影响,硫酸铵盐析的方法提取酶液,并采用Folin法测酶活性.用紫外分光光度计在OD680 nm测吸光值.并对提取的蛋白酶液进行酶的最适温度、pH以及酶的热稳定性和pH稳定性研究,向酶液中添加金属离子和EDTA、PMSF,研究其对酶活性的影响.结果:在培养基初始pH是6.5,培养温度为40℃时菌株产酶酶活性最大;培养基中以乳糖为碳源,酵母膏和硫酸铵为氮源,碳源与氮源的比例为1:2时,酶活最大.酶学性质研究结果显示:该酶的最适反应温度是55℃,最适反应pH是7.0;在50℃保温20 min～80min内,酶活力下降幅度较小.60℃保温60min后,仍保持约60％的酶活.70℃保温60 min后,残余酶活为30％.该酶在pH为6.0～8.0范围内,相对酶活差别不是很大,下降趋势大致相同.在强碱条件下,相对酶活下降很明显.Fe2+、Cu2+和Hg2+对酶活性有明显的抑制作用;Ca2+、Mg2+、Mn2+等金属离子对酶活性有明显的促进作用;乙二胺四乙酸(EDTA)和苯甲基磺酰氟(PMSF)对酶活性也有一定抑制作用.结论:Anoxybacillus sp.DL3所产的蛋白酶为嗜热中性蛋白酶,此酶具有较好的热稳定性和pH耐受性,该菌株具有进一步开发、利用的价值.

关键词：嗜热菌、蛋白酶、产酶条件、酶学性质

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分类号：R939.9;TQ920.1;TS201.3(生药学（天然药物学）)

资助基金：黑龙江省教育厅科技项目12521217

在线出版日期：2013-12-24（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共6页

页码：5619-5624