重组泛素连接酶tTRIP-U-box的构建与表达
目的:构建重组泛素连接酶tTRIP-U-box,并克隆进入pFLAG-CMV4真核表达载体,为研究通过靶向降解接头蛋白TRAF(TNF Receptor Associated Factor)家族蛋白,从而抑制破骨细胞活性提供基础.方法:分别设计引物,扩增tTRIP (TRAF-interacting protein)分子C端伸展的coiled-coiled结构域以及E3泛素连接酶CHIP的U-box结构域,再利用重组PCR,将tTRIP与U-box进行融合,双酶切之后将其插入真核表达载体pFLAG-CMV4,经过酶切鉴定及测序后,转染HEK-293T细胞系,Western印迹验证重组质粒的表达.结果:PCR结果显示tTRIP截短分子和tTRIP-U-box条带大小分别为660bp和1188bp,重组质粒经酶切鉴定和测序证实正确,转染后可见融合蛋白的表达.结论:成功构建真核重组表达载体pFLAG-CMV4-tTRIP-U-box,并且转染HEK-293T细胞系后证实其能够正确表达.
重组泛素连接酶、破骨细胞、基因表达
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Q75;Q78;R593.22(分子遗传学)
国家自然科学基金项目30800492,30972723
2013-11-15（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
共4页
5205-5208
