重组人胰岛素制备过程中转肽工艺的研究

摘要：

目的:酵母表达体系制备重组人胰岛素的工艺中,转肽反应属于酶促半合成反应,过程复杂,成本高昂,通过实验研究提高反应效率,降低反应成本.方法:通过优化转肽反应中胰蛋白酶和双保护苏氨酸(Thr(But)OBut)的比例,寻找有利的反应条件,为进一步的条件确定奠定基础;从提高转肽反应物的反应效率出发,调整工艺顺序,将一步转肽反应调整为两步转肽反应;以胰蛋白酶和双保护苏氨酸两种反应物,进行综合成本分析比较;同时采用药典方法测定两种不同工艺制备的重组人胰岛素,进行生物活性的比较分析.结果:通过实验研究,一步转肽反应的收率最高可以达到74％,而两步转肽收率的收率最高可以达到90％;两步转肽反应相比一步转肽反应,酶量减少70％,双保护苏氨酸的使用量降低62.5％,同时提高了转肽反应中胰岛素原的反应浓度,达到12.5 mM,有着进一步开发的潜质;生物活性测定两种工艺生产的重组人胰岛素均符合中国药典的要求.结论:两步转肽反应对比一步转肽反应,提高了反应效率,产物的纯度较高,降低了反应的成本,有利于提高国产胰岛素的市场竞争力.

关键词：转肽反应、重组人胰岛素、工艺研究、成本分析

所属期刊栏目：13

分类号：R977.1+5(药品)

资助基金：财政部2012年蛋白类生物药和疫苗发展专项资助项目:重组人胰岛素高技术产业化示范工程

在线出版日期：2013-11-22（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：4206-4209,4266