鳞状细胞癌抗原SCCA基因的构建、表达及鉴定

摘要：

目的:重组人鳞状细胞癌抗原(SCCA)的基因及表达融合蛋白,为下一步建立新的肝癌诊断方法奠定基础.方法:提取子宫颈癌细胞株(hela)中的总RNA,应用RT-PCR、PCR等技术扩增出SCCA基因,将其分别与PET-32a及PGEX-4T-1载体连接,转化入DH5α菌中进行克隆,并测序鉴定.异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导转入工程质粒的BL21菌中表达SCCA融合蛋白(分别含有HIS,GST-Tag),并进行SDS-PAGE及Western blotting鉴定.结果:经RT-PCR、PCR扩增后成功获得一条450bp的DNA片段,经测序鉴定与预期序列一致；并成功在大肠杆菌中实现了高表达,经Western blotting鉴定为SCCA融合蛋白.结论:成功获得SCCA目的基因并获得高纯度的SCCA融合蛋白,为进一步开发针对肝癌的SCCA诊断试剂打下基础,开辟诊断肝癌新途径.

关键词：肝癌、SCCA基因、克隆、表达

所属期刊栏目：13

分类号：Q78;R735.7(基因工程（遗传工程）)

资助基金：哈尔滨市科技创新人才研究专项资金项目2008RFXXS018

在线出版日期：2013-08-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：3420-3423