应用高分辨率熔解曲线分析石蜡标本中KRAS基因突变

摘要：

目的:KRAS基因在结直肠癌患者突变率为30％～50％,并且KRAS基因状态与抗EGFR抗体疗效的密切相关.常用的直接测序法其检测灵敏度低、容易出现假阴性结果.采用高分辨率溶解曲线分析法检测结直肠癌中KRAS基因突变,探索其应用于临床检测的可行性.方法:本文收集20例结直肠癌患者石蜡包埋组织标本,应用高分辨率熔解曲线方法检测KRAS基因突变(2,3号外显子).将KRAS基因突变型DNA(p.G12D)和野生型DNA梯度混合稀释,突变型DNA浓度分别为40％、20％、10％、2％,进行高分辨率熔解曲线方法进行检测,并将扩增产物进行直接测序,比较两种方法的灵敏度.结果:在20例结直肠癌患者中检出5例2号外显子突变,p.G12D 2例,p.G12V 2例,p.G13D 1例,3号外显子未检出突变.HRM方法检测基因突变的检出限可达2％,直接测序法检测基因突变的检出限为20％.结论:HRM法比直接测序法灵敏度高,能精确检测出结直肠癌石蜡标本中低浓度的KRAS突变,有望应用于临床基因突变检测.

关键词：高分辨率熔解曲线、结直肠癌、KRAS、基因突变

所属期刊栏目：13

分类号：R735.3(肿瘤学)

资助基金：Natural Science Foundation of Guangdong Province,China10451001002004935 ,S2012040007209;广东省自然科学基金项目10451001002004935,S2012040007209

在线出版日期：2013-07-05（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：2406-2410