ELISA法检测H3N2亚型流感病毒Vero细胞适应株

摘要：

目的:流感病毒Vero细胞适应株A/Yunnan/1/2005va(H3N2)是一株以Vero细胞为培养基质能高产的病毒株,可用于制备以Vero细胞为基质的流感病毒裂解灭活疫苗；通过在低温下连续传代培养,可选育出流感病毒Vero细胞冷适应株,用于制备Vero细胞流感病毒减毒活疫苗为了便于对Vero细胞冷适应株的进一步研究,建立一个检测该病毒株的ELISA方法.方法:以流感病毒Vero细胞适应株A/Yunnan/1/2005Va (H3N2)的纯化抗原为免疫原制备羊抗A/Yunnan/1/2005Va (H3N2)和鸡抗A/Yunnan/1/2005Va (H3N2)的抗血清.将抗血清先后经硫酸铵沉淀法和Protein G亲和层析柱纯化后,以纯化的羊抗A/Yunnan/1/2005Va(H3N2) IgG为包被抗体,鸡抗A/Yunnan/1/2005Va(H3N2) IgG为第二抗体,测定包被抗体、第二抗体和酶标抗体最佳工作浓度,建立双抗体夹心ELISA检测方法.结果:羊抗A/Yunnan/1/2005Va (H3N2) IgG的最佳工作浓度为5μg/mL,鸡抗A/Yunnan/1/2005Va(H3N2) IgG的最适浓度为10 μg/mL,酶标抗体最佳稀释倍数为1∶4000.对已知的阳性样品,经双抗体夹心ELISA法测定的病毒滴度比血凝方法测定病毒滴度灵敏度高.结论:通过测定包被抗体、第二抗体和酶标抗体最佳工作浓度,建立了双抗体夹心ELISA检测流感病毒Vero细胞适应株病毒含量的方法.该方法操作简单、方便快速、敏感性高,可应用于Vero细胞冷适应株选育时对流感病毒Vero细胞适应株A/Yunnan/1/2005va(H3N2)的检测,对于研制Vero细胞流感减毒活疫苗有重要意义.

关键词：流感病毒、H3N2亚型、Vero细胞适应株、ELISA

所属期刊栏目：13

分类号：Q75;R373(分子遗传学)

在线出版日期：2013-07-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：1811-1815