LAMR1与PER1蛋白作用位点的筛选

摘要：

目的:筛选出与PER1蛋白相互作用的LAMR1的核心位点.方法:采用盒式定点突变法,对重组目的质粒pGADT7-Rec/Lamr1201-295的插入片段Lamr1201-295羧基末端的205-216氨基酸序列RDPEEIEKEEQA进行定点突变,并以hPER1蛋白的bHLH-PAS结构域为诱饵蛋白,通过酵母双杂交系统确定这4种不同的突变LAMR 1201-295片段与hPER1的相互作用.结果:营养缺陷培养基筛选显示4种转化菌在二缺SD/-Leu/-Trp、三缺SD/-His/-Leu/-Trp和四缺SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp固体培养基上都可以生长；β-半乳糖苷酶印膜法检测结果显示4种转化菌均可显色.结论:突变片段LAMR1-RDP,LAMR1-EEI,LAMR1-EKE和LAMR1-EQA都能够与hPER1的bHLH-PAS结构域在酵母中发生相互作用.提示LAMR1的205-216Aa可能不是其与hPER1相互作用的核心氨基酸序列.

关键词：PER1、LAMR1、相互作用、酵母双杂交、定点突变

所属期刊栏目：13

分类号：R34;Q51;Q75(人体生物化学、分子生物学)

资助基金：国家自然科学基金项目81101693;云南省科技厅-昆明医科大学联合专项2011FB206

在线出版日期：2013-05-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共5页

页码：14-18