紫红笛鲷MHC Ⅱα和MHC Ⅱβ多克隆抗体的制备

摘要：

目的:制备紫红笛鲷主要组织相溶性复合体MHC Ⅱα和MHC Ⅱβ多克隆抗体,为蛋白水平研究紫红笛鲷MHCⅡ分子提供理论和实践依据.方法:从已有的紫红笛鲷cDNA文库菌中分别克隆其MHC Ⅱα和MHC Ⅱ3分子的部分开放阅读框,与PQE-30构建表达载体,转入大肠杆菌E.coli M15以IPTG诱导表达；纯化得到的重组蛋白与弗氏佐剂混合乳化后注射新西兰大白兔制备多克隆抗体,再以酶联免疫吸附(ELISA)和免疫印迹(Western blot)检测所获抗血清的效价及效果.结果:①重组表达和纯化得到紫红笛鲷MHC Ⅱα和MHC Ⅱβ部分肽链.②制备的紫红笛鲷MHC Ⅱα和MHC Ⅱβ兔抗血清效价都大于1:25600,达到预期水平.③以获得的紫红笛鲷MHC Hα和MHC Ⅱβ兔抗血清分别与紫红笛鲷头肾巨噬细胞蛋白进行免疫印迹,显示两种抗血清能分别杂合出各自的目标蛋白,说明制备的多克隆抗体实际应用效果良好.结论:紫红笛鲷MHC Ⅱα和MHC Ⅱβ多克隆抗血清制备成功.

关键词：MHC、主要组织相溶性复合体、抗体、鱼、紫红笛鲷

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分类号：Q95-33;Q75;Q78;R392.1(动物学)

资助基金：国家自然科学基金项目41106087

在线出版日期：2013-05-03（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：1-4