CREG低表达饲养层STO细胞的建立
目的:为阐明E1A激活基因阻遏子(Cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG)对胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESC)自我更新的影响及作用机制,本研究拟通过RNA干扰方法建立CREG低表达的饲养层STO细胞,为深入研究奠定基础.方法:用Western Blot方法检测饲养层细胞系STO及ESC细胞系R1中CREG基因的表达.利用Lipofectamine 2000向STO细胞中分别转染RNA干扰空对照载体,含有无意义随机序列的对照载体以及含有4种不同CREG干扰序列的载体.用1.0 μg/ml嘌呤霉素筛选1w,荧光显微镜下挑取绿色荧光蛋白表达较高的克隆进行扩增.Western Blot方法鉴定CREG基因干扰效率,获得CREG表达最低的饲养层细胞克隆.将ESC R1接种到该克隆上,不添加白血病抑制因子,连续培养3代,用碱性磷酸酶染色判断其是否分化.结果:R1几乎不表达CREG,而STO细胞高表达CREG.Western Blot结果证实筛选到的STO克隆3A干扰效果最好,达到85％.在不添加白血病抑制因子的情况下,碱性磷酸酶染色表明R1细胞在该株饲养层细胞上连续培养3代后未见明显分化.结论:成功获得CREG低表达饲养层STO细胞,为深入探讨CREG对ESC自我更新的作用及机制奠定了基础.
CREG、RNA干扰、饲养层细胞、胚胎干细胞、自我更新
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Q291
国家自然科学基金重点项目81130072;国家科技部973前期项目2011CB512111;国家自然科学基金面上项目81070097;辽宁省科技攻关项目2010225036
2013-01-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
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6034-6037,6010
