重组人胰激肽原酶复性工艺的研究

摘要：

目的:研究重组人胰激肽原酶包涵体变性及复性的工艺.方法:对本实验室构建的重组人胰激肽原酶大肠杆菌进行IPTG诱导表达表达成功后,菌体经超声破碎释放包涵体,包涵体经洗涤、变性、稀释和尿素梯度凝胶过滤色谱这两种方法复性后(Sephadex-G75),通过测定酶活检验复性效果.结果:①重组人胰激肽原酶工程菌经过IPTG诱导后能够表达目的蛋白,目的蛋白以包涵体形式存在,将细胞破碎后,包涵体经过3次洗涤,纯度达到71.93％；②变性包涵体经24小时稀释复性后,蛋白浓度达到72.61μg/mL,酶的比活达到13.84 U/mg;③变性包涵体经过2个小时的尿素梯度凝胶过滤复性后,蛋白浓度可达到830.07μg/mL,酶的比活达到48.61U/mg.结论:两种复性方法均可以使包涵体达到一定的浓度和比活,比较发现尿素梯度凝胶过滤色谱具有复性时间短和比活力高等优点,可作为重组人胰激肽原酶复性的一种有效的手段.

关键词：重组人胰激肽原酶、包涵体、凝胶过滤复性、尿素梯度

所属期刊栏目：12

分类号：Q55;Q814;TQ564(酶)

在线出版日期：2013-01-23（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页数：共4页

页码：6022-6024,6041