hERG shRNA表达载体构建及其稳定转染骨肉瘤细胞系MG-63、SOSP-9607的建立

摘要：

目的:构建hERG钾离子通道蛋白(human ether-a-go-go-related gene potassium channel )shRNA表达载体质粒,获得稳定转染干扰质粒的人骨肉瘤细胞系MG-63、SOSP-9607.方法:将4对合成的寡核苷酸链退火形成双链,连接入pGPU6/GFP/Neo表达栽体,并测序鉴定.使用脂质体法将重组的质粒转染至MG-63、SOSP-9607,通过G418筛选建立稳定转染的两种细胞系,采用免疫印迹( Western blot)技术检测hERG蛋白的表达.结果:测序结果证实shRNA与栽体连接正确,免疫印迹实验证实hERG蛋白表达显著降低.结论:成功构建了hERG shRNA真核表达载体,获得了稳定表达hERG shRNA的人骨肉瘤细胞系MG-63和SOSP-9607.

关键词：hERG、钾离子通道、骨肉瘤、shRNA、载体构建

所属期刊栏目：12

分类号：Q75;Q78;R738.1(分子遗传学)

在线出版日期：2012-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：2031-2034