Split-marker重组技术构建泛素C末端水解酶基因缺失菌株

摘要：

目的:对烟曲霉(Aspergillus fumigatus)泛素末端水解酶(creB)基因进行敲除.方法:通过氨基酸序列分析软件初步分析烟曲霉CreB蛋白结构.利用split-marker重组技术构建重组片段,并通过PEG-原生质体方法对烟曲霉野生菌株进行转化,采用PCR方法对转化子进行筛选,最后选取初步筛选的转化子进行测序鉴定.结果:结构分析显示烟曲霉CreB蛋白具有泛素特异蛋白酶(ubiquitin-processing protease)UBP亚家族六个结构域.本实验构建了转化片段并转化,在抗性平板中获得了25个Hyg抗性转化子,进一步采用PCR方法筛选到20个转化子,最终通过测序分析获得一株creB基因缺失菌株.结论:Split-marker重组技术是对烟曲霉creB基因进行敲除的快速有效的方法.获得的creB缺失菌株可用于基因功能研究.

关键词：烟曲霉、泛素C末端水解酶、Split-Marker重组技术

所属期刊栏目：12

分类号：Q756;R379.6(分子遗传学)

资助基金：国家自然科学基金30840014;教育部留学回国基金;山东省自然科学基金ZR2010CM011

在线出版日期：2012-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：2017-2021