双酚A干扰大鼠生精过程时TJ渗透性屏障的体外研究
目的:研究体外大鼠睾丸支持细胞紧密连接蛋白(SCJP)在类雌激素-双酚A(BPA)干扰下的损伤机制.方法:对Wistar大鼠睾丸支持细胞(Sertoli细胞)离体原代培养4-5d,通过双室培养模型建立体外紧密连接(TJ)渗透性屏障,并测量其跨上皮电阻值(TER)反应紧密连接结构的形成及BPA对紧密连接的损害程度.设溶剂(DMSO)做阴性对照,以终浓度为25μM、100μM的BPA作用于支持细胞24h,MTT法测不同浓度BPA作用的Sertoli细胞增殖活性.Western bloting观察oecludin、ZO-1、Cx43表达的变化.结果:成功分离并培养Wistar大鼠睾丸支持细胞,并建立良好的体外TJ屏障模型.双室培养支持细胞上皮TER值在培养的d4达到顶峰,然后在d4-9维持相对较稳定的状态,d4以200μM,100μM,25μM BPA染毒,分别于染毒后24,48,72,96和120h测TER:与DMSO溶剂对照组相比,200μM,100μM的BPA组TER值明显下降(P＜0.05),而25μM的BPA组在染毒后TER值无明显变化(P＞0.05).MTT结果显示:经不同浓度BPA作用24h后,Sertoli细胞的吸光度(OD值)随着染毒剂量的增加而逐渐降低.1 02、103μM浓度组与溶剂对照组有显著性差异(P＜0.05),而10-2、10-1、100、101μM组和溶剂对照组无显著性差异(P＞0.05).Western blot结果显示:occludin、ZO-l、Cx43在各剂量组均有表达,与溶剂对照组相比,occludin、ZO-1表达均分别随作用剂量的增加而降低:25μM组、100μM组与溶剂对照组相比,差异均存在显著性(P＜0.05)；100μM组与25μM组相比,差异亦存在显著性(P＜0.05).Cx43的表达却随染毒剂量的增加而增加,与溶剂对照组相比,25μM组表达无明显增加(P＞0.05),而100μM组则明显增加(P＜0.05)；与25μM组相比,100μM组表达明显增加(P＜0.05).结论:双酚A可通过损伤支持细胞连接蛋白正常表达,破坏了TJ屏障渗透性,从而影响正常的精子形成过程.
双酚A、精子形成、紧密连接、支持细胞连接蛋白
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R698(泌尿科学（泌尿生殖系疾病）)
2012-09-29（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1430-1434
