EZH2靶向的shRNA质粒的构建和有效靶序列的筛选
目的:构建并筛选靶向zeste基因增强子人类同源物2(Enhancer of zeste homologue2,EZH2)的短发卡RNA(short hairpin RNA,shRNA)的质粒表达栽体.方法:设计并合成针对EZH2基因的带有小发夹结构的DNA片段并克隆至质粒pGPU6/GFP/Neo中,经酶切和测序分析后转染入胶质瘤U251细胞,分别应用实时荧光定量PCR和Western bloting在mRNA和蛋白质水平观察其对EZH2基因表达的沉默效果.结果:重组质粒构建成功,并成功转染入胶质瘤U251细胞,转染效率大约为70％.其中,以靶向hEZH2-715序列的质粒抑制效果最好,其对U251细胞EZH2mRNA和protein抑制率分别为55％和89％.结论:成功构建了能高效抑制EZH2基因表达shRNA的重组质粒,为下一步探索EZH2在胶质瘤细胞中的生物学作用奠定了基础.
zeste基因增强子人类同源物2、RNA干扰、质粒、胶质瘤
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Q75;Q78;R739.41(分子遗传学)
江苏省医学重点人才基金RC2007029;江苏省社会发展项目BS2007037;淮安市科技发展基金HAS07025;南京医科大学科技发展基金重点项目06NMUZ047
2012-08-16（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
1211-1214,1250
