PMA及乏氧诱导VEGF上调的细胞模型构建及用于RNAi研究

摘要：

目的:探讨佛波酯(PMA)与乏氧诱导对小鼠黑色素瘤细胞B16-F10中血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达量的影响,构建适合RNA干扰(RNAi)的体外细胞模型.方法:通过酶联免疫吸附试验(ELISA法)在蛋白质水平上检测细胞分泌的VEGF量,并用激光共聚焦显微镜观察小干扰RNA(siRNA)转染的细胞胞吞及细胞形态.结果:1MPMA处理细胞2h能明显上调B16-F10细胞中VEGF蛋白的合成及分泌,与常规培养相比,细胞可增加50％的VEGF水平.再经乏氧诱导48 h,稳定释放到培养液里的VEGF浓度大幅提高200％,范围在55-65 pg/mL/h.结论:经PMA和乏氧诱导后,B16-F10细胞稳定的VEGF分泌量与一定时间内分泌的稳定性均表明其适合作为RNAi的体外细胞模型.初步的RNAi结果表明,TKO/siRNA纳米粒与壳聚糖/siRNA纳米粒对于VEGF的沉默效率达40％.

关键词：小鼠黑色素瘤细胞、血管内皮细胞生长因子、PMA诱导、乏氧诱导、RNAi模型

所属期刊栏目：12

分类号：Q782(基因工程（遗传工程）)

在线出版日期：2012-06-28（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）

页码：265-269